胚胎移植

2022-04-06 16:55:36

胚胎（tāi）移植又稱受精卵移植，就是將1頭母畜(供體（tǐ）)的受精（jīng）卵移（yí）植到（dào）另一頭母畜(受體)的子宮內，使之正常（cháng）發育，俗稱“借腹懷胎”。
　　(一)胚胎移植的意義
　　1．充分發揮優良母牛的繁殖潛力一般情況下，1頭優良成年母牛（niú）一年隻能繁殖1頭犢牛，應用胚胎（tāi）移植技術，一年可得到幾頭至幾十頭（tóu）優良母牛的後代，大大加速了良種牛群的建立和擴大。
　　2．誘發肉牛產（chǎn）雙胎對發情的母牛配種後再移植一個胚（pēi）胎到排卵對側子（zǐ）宮角內。這樣配種後（hòu）未受孕的母牛可能因接受移植的胚胎而妊娠，而配（pèi）種後受母牛則由於（yú）增加了（le）一個移植的胚胎而懷雙胎。另外，也可對未配種的母牛在兩側（cè）子宮角各移植一個胚胎而懷雙胎，從而提高生產效率。
　　3．應用胚胎移植還可以減少（shǎo）肉用繁殖母牛的飼養頭數，可以代替種畜的引進和保存品種資源等。
　　(二)胚胎移植（zhí）的生理基礎
　　1．母牛發情後生殖器官的孕向發（fā）育在發情後的（de）最初一段時期(周期性黃體期)，不論是否已受精，母牛生殖係統均處於受精後的生理狀（zhuàng）態之（zhī）下，在（zài）生（shēng）理現象上，妊娠與未孕並無區別（bié）。所以，發情後的母牛生殖器（qì）官的孕向變化，是進行胚胎移植時使不配種的受體母牛可以接受胚胎，並為胚胎發育提供各種（zhǒng）條件的主要生理學依據。
　　2．早期胚（pēi）胎的遊（yóu）離狀（zhuàng）態胚胎在發育早（zǎo）期有相當一段時間(附植之前)是獨立存（cún）在的，它的發育基本上靠本身貯存的養分（fèn），還未和子宮建立實質性聯係。所以，在離開活體情況下，在短時間內可以存活（huó）。當放回與供體相同的環境（jìng）中，即可繼續發育。
　　3.胚胎移植不存在免（miǎn）疫問題受體母畜的生殖道(子宮和輸卵管)對於具有外來抗原物質的胚胎和胎膜組織，一般（bān）來（lái）說，在同一物種之內，並沒有免疫排斥現象，這（zhè）一點對胚胎由一個體移（yí）植給另（lìng）一個體後（hòu）而繼續發育極為有利。
　　4．胚胎和受體的（de）聯係移植的胚胎，在一定時期會和受體子宮內膜建立生理上和組織上的聯係，從而保證了以（yǐ）後的正常發育。此外，受體並不會（huì）對胚胎產生遺傳上的影響，不會影（yǐng）響胚胎固有的優（yōu）良性（xìng）狀。
　　(三)胚胎移植的操作原則（zé）
　　1．胚胎移植前後所處環境（jìng）的一致性即胚胎移植後（hòu）的生活環境和胚胎的（de）發育階段相適應。包括生理上的一致性(即供體和受體在發情時（shí）間上的一致性（xìng）)和解剖位上的一致性（xìng）(即移植後的（de）胚胎與移植前所處的空（kōng）間（jiān）環境的相（xiàng）似性)以及種屬一致性(即供（gòng）體與受體應屆（jiè）同一物種，但並（bìng）不排除種間移植成功的可能性)。
　　2．胚胎（tāi）收集期限胚胎收集和移植的期限(胚（pēi）胎的日齡)不能超過周（zhōu）期黃體的壽命，最（zuì）遲要在周期黃體退化之前數日進行（háng）移植。通常是在供體發情配種（zhǒng）後3一s日內收（shōu）集和移植胚胎。
　　3.在全部操作過程中，胚胎（tāi）不應受到任何不良因素(物理的、化學的、微生物的)的影（yǐng）響而危及（jí）生命（mìng）力。移植的胚胎必須經鑒定並認為是發育正常者。
　　(四)胚胎移植的基本程序胚（pēi）胎移植的基本程序包括供體超排與授精，受體同（tóng）期發情處理、采卵、檢卵和移植（zhí）。關於超排和同期發情處理在前麵已有敘述，本書僅介紹采卵、檢卵和移植。
　　1．胚胎回收（shōu）(采卵) 從供體收（shōu）集胚胎的方法肴手術法和非手術法兩種。
　　(1)手術法按外（wài）科剖腹術的要求進（jìn）行（háng）術前準備。手術部位（wèi）位於右肋部或腹下乳房至臍部之間的腹白線處切開（kāi）。伸進食指找到輸卵（luǎn）管和子（zǐ）宮角（jiǎo），引出（chū）切口外。如（rú）果在輸精後3—4天期間釆卵，受精卵還未移行到（dào）子（zǐ）宮角，可采用輸卵管衝卵（luǎn）的方（fāng）法。將一直徑2毫米，長約10厘米的（de）聚乙烯管從輸（shū）卵管腹腔口插入2—3厘米，另用（yòng）注射器吸（xī）取5—10毫升30℃左右衝卵液，連接7號針頭，在子宮角（jiǎo）前端刺人，再送人輸卵管峽部，注入衝卵液。穿刺針頭應磨鈍（dùn），以免損傷子宮內膜；衝洗速（sù）度應緩慢，使衝洗液連續地流出。如果在輸精後5天收（shōu）胚，還必須做子宮角衝胚。即用10一15毫升衝卵液由宮管結合部子宮角上部向子宮角分叉部衝洗。為了使衝卵液不致由輸卵管（guǎn）流出，可（kě）用止血鉗夾住宮管結合部附（fù）近的輸卵管（guǎn），在（zài）於宮角分叉部插入（rù）回收針，並用腸（cháng）鉗夾住（zhù）子宮與回收針後部，固定回收針，並使衝卵液不致流人子宮體內。
　　(2)非手術法非手術采（cǎi）卵一（yī）般在輸精後5—7天進行。可采用二路導管（guǎn）的衝卵器。二（èr）路式衝卵器（qì）是由帶氣囊的導管與單路管組成。導管中（zhōng）一路為氣囊充（chōng）氣用，另一路為注入和回收衝卵液用。
　　導管中插1根金屬通杆以增加硬度，使之易（yì）於通過子宮（gōng）頸。一般（bān）用直腸把握法將導管（guǎn）經子宮頸導人子宮角。為防止子宮頸緊縮及母牛努責不安，采卵時可在腰薦或尾椎間隙用2％的普魯卡因（yīn）或利多卡因5—10毫升進行硬膜外腔麻醉。操作前清洗外陰部並用酒精消毒。為防（fáng）止導管在陰道內被汙（wū）染，可用外套膜(有商品出售)套在導管外，當導管（guǎn）進人子宮頸後，扯去套膜。將導管插入一側子宮角後，從（cóng）充管向氣囊充氣，使氣囊脹起並觸及子宮角內（nèi）壁，以防止衝卵液倒流（liú）。然後抽出通杆，經單路管向子宮角注入衝卵液，每次15—50毫升，衝洗5—6次，並將衝（chōng）卵液收集在漏鬥形（xíng）容器中。為更多地回收衝卵液，可在直腸內（nèi）輕輕按摩子宮（gōng）角。用同樣方法衝洗對側子宮角。
　　衝卵液多數為組織培養液，如（rú）林格氏液、杜氏磷酸鹽緩衝液(PE)、布林斯特氏液(BMOC-3)和TCM—199等（děng）。常用的為（wéi）杜氏磷酸鹽緩（huǎn）衝液，加入0．4％的牛血清（qīng）白蛋白（bái）或1％一10％犢牛血（xuè）清。
　　衝（chōng）卵液溫（wēn）度使用時應（yīng）為35—37℃，每（měi）毫升要（yào）加入青黴素1000國際單位，鏈黴素500—1000微克（kè），以防止生殖道感染（rǎn）。
　　2．胚胎（tāi）檢查
　　(1)檢卵將（jiāng）收集的衝卵（luǎn）液於37℃溫（wēn）箱內靜置10一（yī）15分鍾。胚（pēi）胎沉底後，移（yí）去上層液。取底部少量液體移至平皿內，靜置後，在實體顯微鏡下先在低倍(10一20倍)下檢（jiǎn）查胚胎數（shù）量（liàng），然後在較大倍數(50—100倍)下觀察（chá）胚胎質量。
　　(2)吸卵吸卵（luǎn）是為了移取、清洗、處理胚胎（tāi），要求目標（biāo）準確，速度快，帶液量少，無丟失。吸卵可用1毫升的注射器（qì）裝上特（tè）別的（de）吸頭進行，也可使（shǐ）用自製的吸卵管。
　　(3)胚胎（tāi）質量鑒定正常發育的胚（pēi）胎，其中細胞(卵裂（liè）球)外形整齊，大小一致（zhì），分布（bù）均勻，外膜完整。無卵裂現象(未受精)和異常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能（néng）用（yòng）於移植。
　　3．胚胎移植
　　(1)手術移（yí）植先將受體母（mǔ）牛作好術前準備（bèi）。已配種（zhǒng）母牛，在右肋部切口，找到非排卵側子宮角，再把吸（xī）有胚（pēi）胎（tāi）的注射器或移卵管刺入子宮角前端，注人（rén）胚胎（tāi）；未（wèi）配母牛在每（měi）側（cè）子宮角各注入一個胚胎；然後將子宮複位，縫合切口。
　　(2)非手術移植非手術移植一般在發（fā）情後第（dì）六至第九天(即胚泡（pào）階段)進行，過早（zǎo）移植會影響受胎率。在非手術（shù）移（yí）植中采用胚胎移（yí）植（zhí）槍和0．25毫升細管移植的效果較（jiào）好。將細管截去適量，吸入少（shǎo）許保存液，吸一個氣泡，然後吸人含（hán）胚（pēi）胎的少許（xǔ）保存液，吸人一個氣泡（pào），最（zuì）後再吸取少許保存液（yè）。將裝有胚胎的吸管裝入移植槍內，通過子宮頸插（chā）入子（zǐ）宮角（jiǎo）深部，注入胚胎。非手術移植要嚴格遵守無菌操作規（guī）程，以防生殖道感染。